home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ Collection of Education / collectionofeducationcarat1997.iso / HEALTH / MED9601.ZIP / M9610446.TXT < prev    next >
Text File  |  1996-01-30  |  3KB  |  45 lines
  1.        Document 0446
  2.  DOCN  M9610446
  3.  TI    Detection of human immunodeficiency virus type 1 proviral DNA by PCR
  4.        using an electrochemiluminescence-tagged probe.
  5.  DT    9601
  6.  AU    Schutzbank TE; Smith J; Children's National Medical Center, Washington,
  7.        D.C., USA.
  8.  SO    J Clin Microbiol. 1995 Aug;33(8):2036-41. Unique Identifier : AIDSLINE
  9.        MED/96057582
  10.  AB    We have developed a rapid, pseudohomogeneous assay for the detection of
  11.        PCR amplicons, based on the use of electrochemiluminescence generated
  12.        from a Tris-bipyridine ruthenium(II) label. PCR amplification of highly
  13.        conserved human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) gag gene sequences
  14.        was performed with SK38 and SK39 primers, the latter of which was 5'
  15.        biotinylated. Post-PCR reaction mixtures were combined with 10(12)
  16.        copies of the SK19 probe-Tris-bipyridine ruthenium(II) conjugate,
  17.        denatured by heating at 100 degrees C for 5 min, and hybridized at 55
  18.        degrees C for an additional 15 min. Hybridization to the biotinylated
  19.        strand of the amplified DNA was determined by the addition of
  20.        streptavidin-conjugated magnetic particles and analyzed by using an
  21.        Origen-1 electrochemiluminescence analyzer. Our results demonstrated a
  22.        sensitivity of fewer than five copies of HIV-1 (pre-PCR), by using
  23.        either purified plasmid DNA containing one complete copy of the HIV-1
  24.        cDNA genome or lysed, proteinase K-treated 8E5 cells as the starting
  25.        material. In an evaluation of actual clinical specimens (peripheral
  26.        blood monocytes from both healthy and HIV-1-infected children), the
  27.        electrochemiluminescent detection assay correlated 100% with both our
  28.        standard method (solution hybridization with a radiolabeled probe
  29.        followed by polyacrylamide gel electrophoresis [PAGE] and
  30.        autoradiography) and a commercial method (Roche Amplicor). The
  31.        electrochemiluminescent method was substantially easier to perform than
  32.        either the PAGE or microtiter plate assays and was considerable faster
  33.        to perform than either of these alternative formats.
  34.  DE    Chemiluminescence  Child  Child, Preschool  Comparative Study  DNA
  35.        Probes  DNA, Viral/*GENETICS/*ISOLATION & PURIF  Electrochemistry
  36.        Electrophoresis, Polyacrylamide Gel  Evaluation Studies  Human  HIV
  37.        Infections/DIAGNOSIS/VIROLOGY  HIV-1/*GENETICS/*ISOLATION & PURIF
  38.        Infant  Infant, Newborn  Polymerase Chain Reaction/*METHODS/STATISTICS &
  39.        NUMER DATA  Proviruses/*GENETICS/*ISOLATION & PURIF  Sensitivity and
  40.        Specificity  Support, U.S. Gov't, P.H.S.  JOURNAL ARTICLE
  41.  
  42.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  43.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  44.  
  45.