home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ Collection of Education / collectionofeducationcarat1997.iso / HEALTH / MED9602.ZIP / M9620409.TXT < prev    next >
Text File  |  1996-02-26  |  4KB  |  55 lines
  1.        Document 0409
  2.  DOCN  M9620409
  3.  TI    Genetic analysis of human immunodeficiency virus type 1 integrase and
  4.        the U3 att site: unusual phenotype of mutants in the zinc finger-like
  5.        domain.
  6.  DT    9602
  7.  AU    Masuda T; Planelles V; Krogstad P; Chen IS; Department of Microbiology &
  8.        Immunology, UCLA School of Medicine; 90095, USA.
  9.  SO    J Virol. 1995 Nov;69(11):6687-96. Unique Identifier : AIDSLINE
  10.        MED/96013761
  11.  AB    Retroviral integration is the step which leads to establishment of the
  12.        provirus, cis- and trans-acting regions of the human immunodeficiency
  13.        type 1 (HIV-1) retrovirus genome, including the attachment site (att) at
  14.        the ends of the unintegrated viral DNA and the conserved domains within
  15.        the integrase (IN) protein, have been identified as being important for
  16.        integration. We investigated the role of each of these regions in the
  17.        context of an infectious HIV-1 molecular clone through point mutagenesis
  18.        of the att site and the zinc finger-like and catalytic domains of IN.
  19.        The effect of each mutation on integration activity was examined by
  20.        using a single-step infection system with envelope-pseudotype virus. The
  21.        relative integration efficiency was estimated by monitoring the levels
  22.        of viral DNA over time in the infected cells. The integration activities
  23.        of catalytic domain point mutants and att site deletion mutants were
  24.        estimated to be 0.5 and 5% of wild-type activity, respectively. However,
  25.        in contrast with previous in vitro cell-free integration studies,
  26.        alteration of the highly conserved CA dinucleotide resulted in a mutant
  27.        which still retained 40% of wild-type integration activity. The relative
  28.        levels of expression of each mutant, as measured by a luciferase
  29.        reporter gene, correlated with levels of integration. This observation
  30.        is consistent with those of previous studies indicating that integration
  31.        is an obligatory step for retroviral gene expression. Interestingly, we
  32.        found that three different HIV-1 constructs bearing point mutations in
  33.        the zinc finger-like domain synthesized much lower levels of viral DNA
  34.        after infection, suggesting impairment of these mutants before or at the
  35.        initiation of reverse transcription. Western blot (immunoblot) analysis
  36.        demonstrated wild-type levels of reverse transcriptase within the mutant
  37.        virions. In vitro endogenous reverse transcription assays indicated that
  38.        all three mutants in the zinc finger-like domain had wild-type levels of
  39.        reverse transcriptase activity. These data indicate that in addition to
  40.        integration, IN may have an effect on the proper course of events in the
  41.        viral life cycle that precede integration.
  42.  DE    Amino Acid Sequence  Animal  Base Sequence  Binding Sites  Cell Line
  43.        Cercopithecus aethiops  Conserved Sequence  DNA
  44.        Nucleotidyltransferases/CHEMISTRY/*GENETICS/*METABOLISM  DNA,
  45.        Viral/GENETICS/METABOLISM  Gene Expression  Genome, Viral  Human
  46.        HIV-1/*ENZYMOLOGY/*GENETICS  Kinetics  Molecular Sequence Data
  47.        Mutagenesis, Site-Directed  Oligodeoxyribonucleotides  Phenotype
  48.        Recombinant Proteins/BIOSYNTHESIS/CHEMISTRY/METABOLISM  RNA-Directed DNA
  49.        Polymerase/METABOLISM  Support, Non-U.S. Gov't  Support, U.S. Gov't,
  50.        P.H.S.  Transfection  Virus Integration  *Zinc Fingers  JOURNAL ARTICLE
  51.  
  52.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  53.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  54.  
  55.