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Text File  |  1996-01-30  |  3KB  |  43 lines
  1.        Document 0043
  2.  DOCN  M9610043
  3.  TI    Characterization of endonucleolytic activity of HIV-1 integrase using a
  4.        fluorogenic substrate.
  5.  DT    9601
  6.  AU    Lee SP; Censullo ML; Kim HG; Knutson JR; Han MK; Department of
  7.        Biochemistry and Molecular Biology, Georgetown; University Medical
  8.        Center, Washington, DC 20007, USA.
  9.  SO    Anal Biochem. 1995 May 20;227(2):295-301. Unique Identifier : AIDSLINE
  10.        MED/96023410
  11.  AB    Retroviruses require viral DNA to be synthesized by reverse
  12.        transcription in the cytoplasm followed by integration of the resulting
  13.        viral DNA into the host chromosome in the nucleus. Reverse transcription
  14.        and integration, essential steps in the life cycle of retroviruses, are
  15.        possible targets in the development of antiviral reagents. One
  16.        attractive target is the integrase protein, a product of the retroviral
  17.        pol gene which is solely responsible for the retroviral integration
  18.        process through cutting and joining reactions. When screening for
  19.        massive numbers of antiviral agents, a rapid and precise assay is ideal.
  20.        We report the application of fluorescence resonance energy transfer
  21.        (FRET) with fluorescein and eosin as the energy transfer pair to
  22.        characterize HIV-IN-mediated DNA cleavage reactions. Past concerns with
  23.        applications of FRET to DNA were due to interactions of the fluorophore
  24.        with the DNA, resulting in quenched fluorescence. However, in this study
  25.        these concerns have been resolved with the use of a nucleotide analog
  26.        with a 12-carbon linker arm, 5-amino (12)-2'-deoxyuridine
  27.        beta-cyanoethyl phosphoramidite. Steady-state fluorescence studies show
  28.        that cleavage of the fluorogenic substrate by integrase results in
  29.        enhancement of quenched donor fluorescence intensity. The fluorescence
  30.        assay was confirmed by autoradiographic analysis of the cleavage
  31.        reaction with radiolabeled fluorogenic substrate. This fluorescence
  32.        assay will facilitate both detailed kinetic studies and the rapid
  33.        screening of novel integrase inhibitors.
  34.  DE    Base Sequence  Deoxyuridine/ANALOGS & DERIVATIVES  DNA/CHEMISTRY
  35.        Endodeoxyribonucleases/*ANALYSIS  Energy Transfer  Eosine
  36.        Yellowish-(YS)/*CHEMISTRY  Fluoresceins/*CHEMISTRY  Fluorescent Dyes
  37.        Molecular Sequence Data  Spectrometry, Fluorescence  Support, Non-U.S.
  38.        Gov't  JOURNAL ARTICLE
  39.  
  40.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  41.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  42.  
  43.